除菌過(guò)濾器的操作如何進(jìn)行?

方法/步驟

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過(guò)濾除菌操作時(shí),濾器和過(guò)濾瓶等裝置使用前用高壓蒸鍋進(jìn)行消毒滅菌

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都需要高壓滅菌,不過(guò)如果你使用的濾器是進(jìn)口滅過(guò)菌的就不需要了,前提是你沒(méi)拆開(kāi)過(guò)。

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KRBB液的配方是：NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。 而10mmol/L HEPES緩衝液配製方法如下：準(zhǔn)確稱取HEPES 2.383g，加入新鮮三蒸水定容至。

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你隻要有濾膜和配套的過(guò)濾器就可以了，一般在超淨(jìng)工作臺(tái)上進(jìn)行。濾膜用0.22微米或0.45微米兩種規(guī)格，指的是濾膜的孔徑大小吧。一般0.22就夠了！

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如果溶液的量比較大，超過(guò)500ml，可以采用已滅菌的抽濾瓶，預(yù)先墊好0.22um 的濾膜。抽濾瓶滅菌前要檢查封口用紗布或棉花堵牢，使用時(shí)，不用在無(wú)菌室中進(jìn)行，隻要保證收集瓶無(wú)菌狀態(tài)就可以。抽濾後，過(guò)濾好的溶液在無(wú)菌條件下倒進(jìn)已滅菌的空試劑瓶中。

如果用小量的溶液過(guò)濾，無(wú)菌室內(nèi)用一次性注射器和一次性0.22um濾膜（millipore或pall都有賣）就可以。

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過(guò)濾的量，如果量小，用注射器加濾器、0.22微米濾膜過(guò)濾，濾器加上濾膜後蓋緊，稍旋鬆，飯盒密封100度蒸餾水煮沸30分鍾滅菌，用來(lái)承接無(wú)菌糖水的瓶需高壓。用時(shí)在無(wú)菌操作臺(tái)上操作，並先旋緊濾器，注意濾器外流下去的哪怕一滴也會(huì)造成染菌；過(guò)濾應(yīng)該是費(fèi)力的，如果感覺(jué)很輕鬆，則濾膜已破。0.45微米的濾膜一般用於兩次過(guò)濾的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高壓更好些。

如果量大，正壓可用蠕動(dòng)泵接皮管接不鏽鋼濾器大張濾膜，這些都是要高壓的。負(fù)壓可用抽濾。